Elabscience谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)活性熒光法測(cè)試盒適用于檢測(cè)動(dòng)物組織樣本及血清(漿)等液體樣本中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)能夠催化丙氨酸和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸在丙酮酸氧化酶的作用下生成H2O2，在過氧化物酶作用下，將無熒光探針氧化為有熒光的物質(zhì)，通過測(cè)定體系熒光值的增加量，即可計(jì)算出 ALT的活性。

試劑準(zhǔn)備

① 檢測(cè)前，所有試劑需平衡至室溫。

② 試劑三工作液的配制：

每支試劑三粉劑用1.2 mL試劑一充分溶解，置于冰盒上待用，可-20°C保存7天。

③ 1 mmol/L丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制：

取10μL試劑五加入到990μL試劑一中，配制成1 mmol/L的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，臨用前現(xiàn)配現(xiàn)用。

④ 50μmol/L丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制：

按照1 mmol/L丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)配液：試劑一體積比為1：19的比例稀釋20倍，即得50μmol/L標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按需配制，置于冰盒上待用。

⑤ 反應(yīng)工作液的配制：

按試劑一：試劑二：試劑三工作液：試劑四體積比為56：4：20：20 的比例混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配，避光保存，按需配制。

實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵點(diǎn)

① 試劑一取用時(shí)應(yīng)倒出部分，再取用，避免試劑污染。

② 樣本加入板孔中時(shí)應(yīng)觸底加入。

操作步驟

① 標(biāo)準(zhǔn)孔：向酶標(biāo)板對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)孔中加入 20μL 的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品。

測(cè)定孔：向酶標(biāo)板對(duì)應(yīng)的測(cè)定孔中加入 20μL 的待測(cè)樣本。

② 向步驟①各孔中加入 100μL 的反應(yīng)工作液。

③ 酶標(biāo)儀上振板 5 s，室溫靜置 3 min，熒光酶標(biāo)儀上設(shè)置激發(fā)光波長(zhǎng) 535 nm，發(fā)射光波長(zhǎng) 587 nm，測(cè)定各孔熒光值，記為 F1，然后于室溫下避光靜置反應(yīng) 60 min，相同波長(zhǎng)條件下測(cè)定各孔熒光值，記為 F2，則△F = F2 - F1。

注：標(biāo)準(zhǔn)孔不需要求差值，直接取反應(yīng) 60 min 后測(cè)定的熒光值做標(biāo)準(zhǔn)曲線即可

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